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phi29 2.0 DNA聚合酶

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A3701A phi29 DNA Polymerase 1000U 600
A3701B 20KU 6,000
A3703A phi29 2.0 DNA Polymerase 500U 800
A3703B 10KU 8,000
phi29 DNA 聚合酶是从嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillus subtilis噬菌体phi29中克隆出的嗜温(30℃)DNA聚合酶,它具有特殊的链置换和连续合成特性,可连续合成长达70kb的DNA片段。phi29 2.0 DNA 聚合酶是phi29 DNA聚合酶的改造体,并经多次纯化分离而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的链置换、连续合成特性(>70kb)的基础上,提高了滚环扩增的反应温度,phi29 2.0 DNA 聚合酶可以在42℃条件下持续的进行DNA合成(而phi29 DNA 聚合酶在此温度下反应活性很低)。
这种高温的反应特性,具有以下优势:(1)在NGS测序中,其提升了高GC含量、回文结构等复杂模板的延伸能力,使得NGS的覆盖度更均一,降低测序所需深度;(2)高温的反应条件,提升了WGA产物的合成量(2-5倍),并缩短扩增时间(1~2h完成建库扩增);(3)降低测序中Gap区域,提升单细胞测序的数据质量和完整度;(4)降低非特异性扩增产物;(5)提升MDA/RCA等实验的扩增性能和特异性。
此外,该酶仍然具有很强的3’→5’外切酶校读功能,合成的DNA片段保真性高。该酶的外切酶活性较强,因此合成过程中引物需要3’端硫代修饰,以降低外切活性对引物的切割效应。

主要特征

  • 超强链置换能力
  • 连续合成能力
  • 扩增的高保真性

应用

  • DNA恒温滚环扩增
  • 需强链置换和DNA连续合成的反应
  • 质粒快速复制
  • 高保真快速复制

储存

-20℃可保存3年。

注意事项

1. 1×phi29 Buffer:50 mM Tris-HCl pH 7.5,10 mM MgCl2,10 mM (NH4)2S04,4 mM DTT。必要时可单独额外添加终浓度1 mM DTT和0.2 mg/ml BSA,可提高反应效率。
2. 65℃ 10min即可使该酶失活。
3. 根据实验类型需要,调整dNTP的浓度100~500 μM。
4. 添加Yeast Pyrophosphatase(货号:C5006)可提高DNA产量。
5. 反应引物3’端的硫代修饰可避免引物降解。

实例

用硫代修饰的6N随机引物和两种phi29 DNA聚合酶分别在30°C和42°C对不同量的pUC57质粒进行扩增,结果如下图;由图可见,phi29 2.0 DNA聚合酶在42°C条件下2h即可完成扩增,且产量相对较高。
耐热phi29 DNA聚合酶