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| phi29 DNA 聚合酶是从嗜热脂肪芽孢杆菌Bacillus subtilis噬菌体phi29中克隆出的嗜温（30℃）DNA聚合酶，它具有特殊的链置换和连续合成特性，可连续合成长达70kb的DNA片段。phi29 2.0 DNA 聚合酶是phi29 DNA聚合酶的改造体，并经多次纯化分离而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的链置换、连续合成特性（>70kb）的基础上，提高了滚环扩增的反应温度，phi29 2.0 DNA 聚合酶可以在42℃条件下持续的进行DNA合成（而phi29 DNA 聚合酶在此温度下反应活性很低）。 这种高温的反应特性，具有以下优势：（1）在NGS测序中，其提升了高GC含量、回文结构等复杂模板的延伸能力，使得NGS的覆盖度更均一，降低测序所需深度；（2）高温的反应条件，提升了WGA产物的合成量（2-5倍），并缩短扩增时间（1~2h完成建库扩增）；（3）降低测序中Gap区域，提升单细胞测序的数据质量和完整度；（4）降低非特异性扩增产物；（5）提升MDA/RCA等实验的扩增性能和特异性。 此外，该酶仍然具有很强的3’→5’外切酶校读功能，合成的DNA片段保真性高。该酶的外切酶活性较强，因此合成过程中引物需要3’端硫代修饰，以降低外切活性对引物的切割效应。 |
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主要特征 |
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应用 |
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储存 |
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| -20℃可保存3年。 | |||||||||||||||||||||||
注意事项 |
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| 1. 1×phi29 Buffer：50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl2，10 mM (NH4)2S04，4 mM DTT。必要时可单独额外添加终浓度1 mM DTT和0.2 mg/ml BSA，可提高反应效率。 2. 65℃ 10min即可使该酶失活。 3. 根据实验类型需要，调整dNTP的浓度100~500 μM。 4. 添加Yeast Pyrophosphatase（货号：C5006）可提高DNA产量。 5. 反应引物3’端的硫代修饰可避免引物降解。 |
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实例 |
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| 用硫代修饰的6N随机引物和两种phi29 DNA聚合酶分别在30°C和42°C对不同量的pUC57质粒进行扩增，结果如下图；由图可见，phi29 2.0 DNA聚合酶在42°C条件下2h即可完成扩增，且产量相对较高。 | |||||||||||||||||||||||
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