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Bst2.0 HNB变色扩增试剂盒

HaiGene可用于LAMP等实验用的恒温扩增预混Mix系列,全部更名为IsoAmp MasterMix,货号和性能保持不变!
LAMP技术学习资料
产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A3824-10 Bst 4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix (with UDG) 100T(20ul体系) 2,000
A3824-01 Bst 4.0 Red IsoAmp MasterMix 100T(20ul体系) 1650
A3824-02 Bst 4.0 IsoAmp MasterMix 100T(20ul体系) 1650
A3824-03 Bst 4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix 100T(20ul体系) 1650
A3821 OG 橙绿变色管 48支 500  
A3802 Bst 2.0 HNB变色扩增试剂盒 50T/200T 750/2000
已开发产品
A3825-16 2019-nCoV Red恒温可视化核酸扩增试剂盒 100T 3500
A3825-26 2019-nCoV OG恒温可视化核酸扩增试剂盒 96T 3700
A3825-36 2019-nCoV 恒温荧光法核酸扩增试剂盒 100T 3500
在核酸分子的恒温扩增过程中,无论采用LAMP、HDA、RCA、CPA、SMAP等扩增技术,这种高速度的扩增特性,均不可避免的引起假阳性扩增。这种假阳性的扩增情况在LAMP扩增中表现尤为明显,由于LAMP扩增用到很高浓度的引物,因此难免保证有少量错配和引物Dimer,这些轻微的污染都会导致在LAMP高速扩增中造成假阳性。HaiGene优化的反应缓冲液,配合独有的显色技术和阴性控制技术建立的预混恒温mix系列产品,可高灵敏度、高特异性的用于LAMP HNB变色、LAMP红黄变色、LAMP OG变色、 LAMP 浊度分析、LAMP SYBR Green荧光检测、HDA荧光检测、RCA荧光检测、CPA荧光检测、SMAP荧光检测的扩增反应。在LAMP扩增实验中,与其它公司提供的 DNA/RNA LAMP MasterMix 或 LAMP Mix相比,得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能,HaiGene的 Bst 4.0 IsoAmp Red MasterMix具有更快的扩增速度和杂质耐受性。
Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶对dUTP底物的超强识别能力,扩增反应所需的核苷酸底物dTTP可被dUTP完全取代,因此扩增产物均包含dUTP,在配合热敏UDG的情况下,气溶胶污染物,将会在起始反应阶段被彻底清除。而后续热敏UDG在65℃条件下3min内,完全不可逆失活;从而既能消除污染物,又能保证核酸正常扩增。因此,应用该试剂能大大降低LAMP反应中由于气溶胶污染造成的假阳性信号。

使用特征

  Bst 4.0 MasterMix
特点 单组分预混
扩增用酶 Bst3.0+ThermoStable V
DNA模板 ★★★★★
RNA模板 ★★★★★
扩增速度 ★★★★★
反应温度 60-68℃
杂质耐受性 ★★★★★

以2019-nCov核酸扩增为例三种方法的性能比较

  红黄变色可视化
(Cat.No.:A3824-01)
橙绿变色可视化
(Cat.No.:A3824-02)
荧光法
(Cat.No.:A3824-03)
试剂信息  靶标均为N基因,冻干Assay均相同;搭配不同Buffer实现不同的显色。
检测方法 肉眼观测 肉眼观测 SYBR Green荧光
检测设备 水浴锅、金属浴、PCR仪 水浴锅、金属浴、PCR仪 定量PCR或恒温荧光仪
阳性判读方式 黄色为阳性 绿色为阳性 有扩增曲线为阳性
反应温度 60-65℃
反应时间 30min 20min 15-18min
灵敏度(100%检出) 10 copies/test 10 copies/test 10 copies/test
单copy检出率 10-30% 30-50% 30-50%
假阳性比例 <1% <1% <1%
抗杂质能力 +++ +++++ +++++
操作通量 可高通量检测 不适宜大量样本 30-50%

实例展示

1、A3824-01 红黄变色反应(肉眼观察)
以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前,下图为 65 度反应 30min 后。
LAMP红黄变色反应
2、A3824-02 搭配 OG 橙绿变色反应管(A3821)(肉眼观察)
以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前,下图为 65 度反应 20min 后。
LAMP橙绿变色反应
3、A3824-03 用于荧光检测(便携式恒温检测仪)
以2019-nCoV 体外转录 RNA 为模板,1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy,NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起始前,下图为 65 度反应 26min 后。
LAMP荧光扩增反应
4、A3802 用于HNB变色扩增反应
采用环引物对7个样本(HHV-6 DNA核酸模板进行恒温HNB变色检测反应),NTC为不加模板的对照,产物以HNB显色如下图。
LAMP HNB变色反应
5、首先使用含dUTP的Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix扩增获得三种基因产物(AFSV P72,Covid-19 N Gene-1,Covid-19 N Gene-2),然后以105拷贝的含U产物作为模板,分别用Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix(with UDG)和Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix 进行扩增,反应结束后统计两组之间的Ct,结果为:UDG组在30min内几乎不起峰,无信号;未加UDG组均在4min之前起峰,表明该Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix(with UDG)具有良好的去除残留模板的能力。
LAMP防污染扩增
关于LAMP核酸扩增的技术专利与商标:LAMP核酸扩增技术专利由日本荣研化学株式会社所拥有(专利号CN1420928A/CN1222614C)。除此外,LAMP商标也隶属日本荣研化学株式会社。关于LAMP的商业化核酸检测专利和商标授权使用,请联系荣研生物科技(中国)有限公司。HaiGene提供的恒温扩增原料用酶与预混Mix系列产品,可用于LAMP扩增反应,但并不仅限于LAMP扩增,还可以进行RCA (Rolling Circle Amplification)、HDA(Helicase Dependent Amplification)、 SMAP(Smart Amplification Process)、CPA(Crossing Priming Amplification)等恒温扩增方法。