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HiFi One-Step RT-PCR Mix

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
D0405A 5×HiFi One-Step RT-PCR Mix 250T 1,000
本试剂采用稳定高效的RT-PCR预混体系,是以RNA为模板进行一步法RT-PCR的专用试剂。其原理为用基因特异性引物进行反转录反应,获得第一链cDNA(不可使用Oligo(dT)或Random Rimer合成第一链cDNA),再使用基因特异性正向引物和反向引物进行PCR扩增,在同一反应体系中一步完成从反转录到PCR的全部过程。反应体系中已含有电泳所需的指试剂(蓝色和黄色),反应后可以直接进行电泳。
在本试剂中,将耐热M-MLV反转录酶、Rnase Inhibitor、Hotstart高保真DNA聚合酶以及稳定剂等配制成50×One-Step Enzyme Mix预混液;反应Buffer、dNTP以及电泳指示染料配制成5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer,因此使得操作更加简单便,扩增产物可用于平端克隆和DNA测序。

组分

组分名称 250T
50×One-Step Enzyme Mix 100 μl
5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer 1 ml
RNase Free H2O 1 ml×3
注意:1.50×One-Step Enzyme Mix粘度高,第一次使用之前要离心收集至反应管底部,吸取时应缓慢小心。
2.由于使用了Hotstart高保真DNA聚合酶,反应配制可在常温进行,但各组分应-20°C保存。

主要特征

  • 耐热M-MLV反转录酶可在55℃反应能更好的打开复杂二级结构,只需10min即可完成逆转录。
  • DNA聚合酶为热启动型高保真酶,能够有效的抑制非特异性反应且具有较高的校正活性,酶激活仅需2min。
  • 具有宽泛的模板量兼容性,10 ng~1μg都可有效扩增。
  • 反应过程中无需开盖,避免了操作过程中的污染危害。

储存

请置于-20°C,可保存2年;避免反复冻融。

实例

1.以Hela细胞总RNA为模板,使用HiFi One Step RT PCR Mix扩增不同长度的目的片段。电泳结果显示,166bp~4128bp 的 DNA 片段都得到了良好的扩增。
基因名称 模板使用量
gDNA:500bp、2kb、5kb、8kb、12kb ≤2kb 50ng
2kb~8kb 100ng
>8kb 200ng
λDNA:500bp、1kb、2kb、5kb、8kb、15kb、20kb 50 ng
Hela cDNA:166bp、552bp、1574bp、1705bp、2755bp、4128bp ≤2kb 相当mRNA 50ng
>2kb 相当mRNA 200ng

>1000 bp

1000~3000 bp

>3000 bp

55°C,10min

55°C,10min

55°C,10min

95°C,2min

95°C,2min

95°C,2min

95°C,20s

58°C,20s

72°C,30s32cycles

95°C,20s

58°C,20s

72°C,1min20s32cycles

95°C,20s

58°C,20s

72°C,2min 5s32cycles

72°C,2min

72°C,2min

72°C,2min

M:D10000 DNA Marker,1-7分别为:β-actin(166bp)、GAPDH (552bp)、GAPDH(960bp)、BMP2 (1574bp)、PRKN (1705bp)、TFRC (2755bp)和TFRC( 4128bp)。

2. 以Hela细胞总RNA为模板,使用不同的RNA模板量(1 ng、10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、600 ng、800 ng、1 μg)进行HiFi One Step RT PCR Mix扩增。电泳结果显示,三种不同长度的片段都获得良好的扩增,过多的模板可能会抑制扩增。

960bp

1574bp

4128bp

55°C,10min

55°C,10min

55°C,10min

95°C,2min

95°C,2min

95°C,2min

95°C,20s

58°C,20s

72°C,30s32cycles

95°C,20s

58°C,20s

72°C,1min20s32cycles

95°C,20s

58°C,20s

72°C,2min 5s32cycles

72°C,2min

72°C,2min

72°C,2min

M:D10000 DNA Marker,1-9分别为1 ng、10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、600 ng、800 ng、1 μg的 RNA模板扩增产物。