产品编号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
说明书 |
A3201 |
RAPA HiFi DNA Polymerase |
500U |
1,500 |
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RAPA HiFi DNA聚合酶,其来源于高保真DNA聚合酶,并加入了增强的延伸结构,使其具有超保真性能(~280倍Taq)、长片段扩增能力、高产量。长片段扩增能力,使用该酶可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA、8kb的cDNA。该酶具有6kb/min以上的延伸速度。该酶具有5’-3’的聚合酶活性、强3’-5’的外切酶活性,产物为平末端。 |
主要特征
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- 超保真扩增:~280倍Taq的保真性能,是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。
- 快速扩增:具有6kb/min的扩增能力。
- 长片段扩增:质粒、λDNA 等简单模板可以有效扩增>20 kb,基因组可以有效扩增>8 kb,cDNA可以有效扩增>8kb。
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组分
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组分名称 |
500U |
RAPA HiFi DNA Polymerase(5 U/μl) |
100 μl |
2xRAPA HiFi Buffer |
1 ml×5 |
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单位定义
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一个活力单位即在在74°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。 |
储存
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长期储存置于-20°C以下,可保存2年;短期使用置于4°C(3个月)保存。 |
使用方法
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1.按下表配制反应体系并混合均匀:
2xRAPA HiFi Buffer 12.5 μl
RAPA HiFi DNA Polymerase(5 U/μl) 0.25 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 0.25 μl
上游引物(10 μM) 1 μl
下游引物(10 μM) 1 μl
*模板DNA 1-250 ng
ddH2O up to 25 μl |
*模板DNA用量参数(25 μl反应体系,目的片段≤20kb)
5-250 ng Genomic DNA
0.1-10 ng Plasmid DNA
1-2 μl cDNA from RT reaction |
2. PCR扩增循环参数 |
(1)扩增片段<5kb时采用如下程序
循环数 |
温度 |
时间 |
1st Cycle |
95°C |
1min |
25-35 Cyclese |
95°C |
30s |
50~60°C |
30s |
72°C |
6kb/min |
Last Cycle |
72°C |
2min |
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(2)扩增片段>5kb时采用如下程序
循环数 |
温度 |
时间 |
1st Cycle |
95°C |
1min |
25-35 Cyclese |
95°C |
30s |
50~60°C |
30s |
72°C |
2-3kb/min |
Last Cycle |
72°C |
2min |
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3.注意事项 |
(1)当模板GC含量>65%时,请添加5×Q-Solution(Cat. No.: A3002)。
(2)当扩增片段<1kb时,延伸时间可直接使用15s,当扩增片段>5 kb时,按照2-3 kb/min的延伸时间进行设置,能获得更高的产量。
(3)由于不同的PCR管其导热性能有所不同,通常PCR采用25 μl体系可以获得更高的产量。 |