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TGIRT-III Reverse Transcriptase

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
D0310 TGIRT-III Reverse Transcriptase 1nmol 2,500
TGIRT-III RTnase具有依赖于DNA/RNA杂交链的反转录酶活性,能快速合成cDNA,该酶具有强的链转换活性(Switch)。因此该酶可用于tRNA、ncRNA、miRNA等核酸分子的同步逆转录和加接头(TGIRT template-switching reaction,用于TGIRT-Seq)。TGIRT-III RTnase具有极强的延伸性能,因此更易获得全长的cDNA。除此外,该酶具有的强switch活性,使得可以利用RNA的5’端帽结构进行SMART建库(SAMRT-Seq)。该酶的反应温度为37-60°C,最佳反应温度为50°C。

主要特征

  • 比逆转录病毒逆转录酶更高的热稳定性,持续性和保真度,允许从高度结构化或严格修饰的RNA进行全长的端到端cDNA合成。
  • 新的端对端模板转换活性,其能够在逆转录过程中连接RNA-seq或PCR接头,并且不再需要单独的RNA 3'-接头连接步骤
  • 不需要RNA连接酶,对模板量要求低,使得RNA-seq文库构建步骤简化从而更高效。

组分

组分名称 1nmol
TGIRT-III RTnase (10 pmol/μl) 100 μl
5×TGIRT Buffer 1 ml
100mM DTT 0.5 ml

应用

  • 链特异性转录组分析
  • 全细胞或无细胞转录组测序
  • 非编码RNA转录组测序
  • RIP-seq, HITS-CLIP, irCLIP and CRAC
  • 通过高通量测序鉴定RNA碱基修饰
  • RNA结构映射
  • 长cDNA的合成
  • 全基因组或靶向RNA结构分析

失活

反应结束后,向反应体系中加入1μl的5N NaOH,并置于95°C下加热3min,失活该酶。失活后加入5N HCl中和高碱性条件。

储存

长期储存置于-20°C以下,可保存2年;短期使用置于4°C(3个月)保存。

使用方法

1.典型的TGIRI-Seq反应:
5×TGIRT Buffer                                       4 μl
100mM DTT                                            2 μl
RNA                                                  1~50ng
1μM of Annealed DNA/RNA duplex        2 μl
TGIRT-III RTnase (10 pmol/μl)                1 μl
RNase Free H2O                       up to 17.5 μl

室温孵育30min后,加入2.5 μl的10mM dNTP后,于37-60°C(推荐温度为50°C)条件下反应5-60min(通常15min)。