产品编号 |
产品名称 |
规格 |
价格(元) |
说明书 |
D0310 |
TGIRT-III Reverse Transcriptase |
1nmol |
2,500 |
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TGIRT-III RTnase具有依赖于DNA/RNA杂交链的反转录酶活性,能快速合成cDNA,该酶具有强的链转换活性(Switch)。因此该酶可用于tRNA、ncRNA、miRNA等核酸分子的同步逆转录和加接头(TGIRT template-switching reaction,用于TGIRT-Seq)。TGIRT-III RTnase具有极强的延伸性能,因此更易获得全长的cDNA。除此外,该酶具有的强switch活性,使得可以利用RNA的5’端帽结构进行SMART建库(SAMRT-Seq)。该酶的反应温度为37-60°C,最佳反应温度为50°C。 |
主要特征
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- 比逆转录病毒逆转录酶更高的热稳定性,持续性和保真度,允许从高度结构化或严格修饰的RNA进行全长的端到端cDNA合成。
- 新的端对端模板转换活性,其能够在逆转录过程中连接RNA-seq或PCR接头,并且不再需要单独的RNA 3'-接头连接步骤
- 不需要RNA连接酶,对模板量要求低,使得RNA-seq文库构建步骤简化从而更高效。
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组分
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组分名称 |
1nmol |
TGIRT-III RTnase (10 pmol/μl) |
100 μl |
5×TGIRT Buffer |
1 ml |
100mM DTT |
0.5 ml |
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应用
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- 链特异性转录组分析
- 全细胞或无细胞转录组测序
- 非编码RNA转录组测序
- RIP-seq, HITS-CLIP, irCLIP and CRAC
- 通过高通量测序鉴定RNA碱基修饰
- RNA结构映射
- 长cDNA的合成
- 全基因组或靶向RNA结构分析
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失活
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反应结束后,向反应体系中加入1μl的5N NaOH,并置于95°C下加热3min,失活该酶。失活后加入5N HCl中和高碱性条件。 |
储存
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长期储存置于-20°C以下,可保存2年;短期使用置于4°C(3个月)保存。 |
使用方法
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1.典型的TGIRI-Seq反应:
5×TGIRT Buffer 4 μl
100mM DTT 2 μl
RNA 1~50ng
1μM of Annealed DNA/RNA duplex 2 μl
TGIRT-III RTnase (10 pmol/μl) 1 μl
RNase Free H2O up to 17.5 μl |
室温孵育30min后,加入2.5 μl的10mM dNTP后,于37-60°C(推荐温度为50°C)条件下反应5-60min(通常15min)。
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