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mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix (with UDG)

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A3206A 热启动mTTx DNA/RNA 聚合酶 (5U/ul) 250U 1,750
A2263A mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix(with UDG) 1 ml 850
A2263B 25 ml 12,000
RD2262 RNA TaqMan荧光PCR核酸检测试剂盒开发服务 询价  
mTTx DNA/RNA聚合酶为对TTx聚合酶进行电子重构架,改变了TTx的活性配体中心,使其在Mg2+条件下仍然具有极强的逆转录活性。mTTx DNA/RNA Polymerase在Mg2+条件下对于DNA模板和RNA模板扩增能力几乎无偏差,这种独有的特性使得mTTx不再受限于反应Buffer系统,增加了其应用的拓展性,使得多种类型的实验得以实现,包括:采用单酶进行TaqMan RT-PCR、在单管相同的Buffer系统中对RNA和DNA进行多重检测、超多重的RNA模板扩增、RNA的NGS建库、高保真RT-PCR扩增等。
mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix(with UDG)中dTTP大部分被dUTP替代,因此扩增产物带有dUTP碱基,在配合热敏UDG(该酶在92℃热变性5min后不可逆失活,不影响后续PCR反应)消化的情况下,可有效降低气溶胶污染现象;在105 copies污染物的测试条件下,Ct推迟12个以上(污染去除能力>99.98%),因此该qPCR Mastermix在一步法qPCR反应中具有良好的去除核酸气溶胶污染的能力。

主要特征

  • 可以有效的使用dUTP, 良好的去除核酸气溶胶污染的能力
  • 依赖于DNA模板的聚合酶活性;
  • 5'-3'外切酶活性,用于TaqMan探针切割;
  • 金属配体离子为Mg2+通常使用浓度2-3.5mM;
  • 热启动版本的mTTx在50℃条件下100%无活性,92℃加热5min后恢复活性。
  • 相比于TTx DNA聚合酶,mTTx的耐热性能有所下降,92℃条件下的半衰期为30min;

单位定义

一个活力单位即在在68°C条件下,30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年,避免反复冻融。

实例展示

1.首先使用含dUTP的mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix扩增三种基因产物(GAPDH,AFSV P72,Covid-19 N Gene),然后以105拷贝的含U产物作为模板,分别用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix(with UDG)和mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix进行扩增,反应结束后统计两组之间的△Ct,结果为:这三个基因的△Ct值分别为12.3、13.4、12.9;△Ct值越大说明去除残留产物的效率越高,表明该mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix(with UDG)具有良好的去除残留模板的能力。
直接一步法RT-qPCR
2. 以2019新冠病毒N基因体外转录RNA直接作为模板,应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标RNA进行TaqMan qPCR扩增,结果表明不同拷贝数的RNA,扩增性能良好。
直接一步法RT-qPCR
3. 应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标DNA和RNA进行TaqMan qPCR扩增,结果表明该产品对DNA模板和RNA模板扩增几乎无偏差,RNA模板比DNA模板更容易检出。
直接一步法RT-qPCR
4.将不同数量的Jurkat细胞直接加入到TaqMan PCR反应体系中,应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix进行内参基因GAPDH的TaqMan qPCR扩增。
直接一步法RT-qPCR