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3173 DNA Polymerase


产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A3602A 3173 DNA Polymerase 250U 400
A3602B 2500U 3,000
3173 DNA Polymerase为来源于病毒的热稳定型DNA聚合酶,通过点突变修饰,使其3’-5’外切活性缺失(exo-形式)而获得更佳的扩增活性。该酶除了具有依赖于DNA的聚合酶活性,还具有依赖于RNA的逆转录活性,因此可用于单管RT-PCR扩增。该酶具有强烈的链置换活性,可用于DNA或RNA的等温扩增。在以RNA为模板的LAMP实验中,可实现单酶系统反应。对于有复杂二级结构的RNA模板,可通过92度加热3s来得到好的扩增效果,而Bst pol在此温度加热后导致扩增活性丧失。
3173 DNA 聚合酶在95°C条件下的半衰期为20min,因此PCR的起始预变性时间通常为1~2min。该酶搭配两种Buffer:10×3173 Isothermal Buffer和5×Best PCR Buffer。10×3173 Isothermal Buffer用于恒温PCR扩增,其反应温度不能超过70°C。 5×Best PCR Buffer用于常规PCR扩增,94°C预变性时间不可超过5min。

主要特征

  • 同时具有较强的延伸能力和逆转录活性
  • 耐热性能极强,对于复杂模板的扩增活性强
  • 强烈的链置换活性,可应用于LAMP检测

组分

组分名称 数量
3173 DNA Polymerase (5 U/μl) 50 μl/500 μl
10×3173 Isothermal Buffer 1 ml/5 ml
5×Best PCR Buffer 1 ml/5 ml

单位定义

一个活力单位即在65°C条件下,30分钟内催化25nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

应用

  • 恒温PCR扩增
  • DNA LAMP和RT-LAMP
  • 链置换基因合成
  • 在60-70度之间具有反转录活性,可用于单管RT-PCR

储存

-20℃可保存3年。

使用方法

1.以DNA为模板进行PCR扩增
反应体系配制
3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
5×Best PCR Buffer                                    10 μl
dNTP Mixture (2.5 mM each)                        4 μl
模板DNA                                              1ng~1ug
上游引物(10 μM)                                       5 μl
下游引物(10 μM)                                       5 μl
ddH2O                                              Up to 50 ul
PCR扩增循环参数 
循环数 温度 时间
1st Cycle 90°C 2min
25-40 Cycles 90°C 15s
Tm 15s
72°C 1kb/1min
Last Cycle 72°C 5min
2.以RNA为模板进行RT-PCR扩增
反应体系配制
3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                     1 μl
5×Best PCR Buffer                                    25 μl
dNTP Mixture (10 mM each)                        5 μl
模板RNA                                            10ng~1ug
上游引物(10 μM)                                     2 μl
下游引物(10 μM)                                     2 μl
ddH2O                                           Up to 50 ul
PCR扩增循环参数 
循环数 温度 时间
1st Cycle 60°C 60min
35 Cycles 90°C 15s
57°C 15s
72°C 1kb/1min
Last Cycle 72°C 5min
3.缺刻恒温PCR扩增
3173 DNA Polymerase (5 U/μl)                   1 μl
10×3173 Isothermal Buffer                         5 μl
dNTP Mixture (10 mM each)                      5 μl
模板DNA                                         10ng~1ug
引物(500 μM)                                         5 μl
ddH2O                                           Up to 50 μl
55°C孵育2~8h。