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RAPA3G动物组织直扩PCR试剂盒

—杂质高耐受性、高成功率、长片段、高产量、快速、热启动、高保真

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A0606A 2XRAPA3G全能PCR Mix 1 ml 320
A0606B 10 ml 2650
A0607A 2XRAPA3G全能PCR Mix(with dye) 1 ml 320
A0607B 10 ml 2650
A0608 RAPA3G植物组织直扩PCR试剂盒 80T(50 μl 体系) 750
A0609 RAPA3G动物组织直扩PCR试剂盒 80T(50 μl 体系) 750
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A0605B 10 ml 2650
RAPA3G DNA聚合酶为经电子重构架的第三代Taq DNA聚合酶,第三代DNA聚合酶具有高度的杂质耐受性、长片段扩增能力、高扩增成功率、高产量等特征,从而使得RAPA3G系列产品可用于粗制样品的直接扩增,无需核酸纯化步骤。杂质耐受性方面,该酶可耐受植物中的多糖多酚;全血、血清、血浆中的肝素、高浓度的血红蛋白、甘油三脂;乙醇;胍盐;SDS等强PCR抑制剂。在血液直扩PCR实验中,RAPA3G PCR Mix性能与KAPA3G DNA聚合酶展现出同等的表现,其性能表现优于二代聚合酶(血液扩增Hemo KlenTaq Mix)。在植物直扩PCR实验中,RAPA3G PCR Mix在配合DNA释放剂的条件下与KAPA3G Plant PCR试剂盒性能一致。
长片段扩增能力方面,使用该酶可轻松扩增8kb的基因组片段,20kb的λ DNA,8kb的cDNA。该酶具有6kb/min以上的扩增速度,可显著的缩短PCR的扩增时间,在常规测试条件下,10s的延伸时间可完成1kb的基因组DNA扩增。在PCR扩增成功率方面,与其它类型的PCR扩增试剂对比中,RAPA3G PCR Mix表现出卓越的PCR扩增成功率。此外,该酶包含一定比例的RAPA HiFi超保真DNA聚合酶,因此其具有一定的保真性能(经蓝白斑测试,其保真性能约为Taq DNA聚合酶的56倍)。另外,RAPA3G系列产品均采用HaiGene专有的热启动技术,确保50°C以下完全无活性,仅有95°C加热5min以后才能恢复其活性,因此可最大限度的提高扩增的特异性,减少非特异性产物的产生。该PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的外切酶活性和3'-5'的外切酶活性,产物部分带有"A"尾巴,部分为平末端,因此产物均可用于TA克隆或平端克隆。

特征和用途

  • 快速扩增:具有6kb/min的扩增能力,1kb片段可在25min内完成扩增.
  • 高成功率扩增:RAPA3G PCR Mix具有最高的PCR扩增成功率。
  • 液体样品直接扩增:全血、血清、培养细胞、尿液等样本直接进行PCR扩增,无需核酸纯化。
  • 组织样本直接扩增:叶片、种子、果实、动物组织等样品,可以直接扩增,也可采用DNA释放剂简单处理后直接扩增,无需核酸纯化。
  • 长片段扩增:质粒、λ DNA 等简单模板可以有效扩增>20 kb,基因组可以有效扩增>8 kb,cDNA可以有效扩增>8kb。
  • 高保真扩增:保真度是 Taq DNA Polymerase 的56 倍。
  • 高特异性:采用HaiGene专有热启动技术,50°C以下无活性,仅有95°C加热5min才能恢复酶活。

RAPA3G DNA聚合酶对抑制物耐受性

SDS 0.01% 胍盐 0.25%
乙醇 5% 全血 15%
肝素 0.1IU/ml 血清 15%
Trizol 0.5% 血浆 2%
血红蛋白 30μM 尿液 5%

50μl体积建议添加的样品量

抗凝全血 2.5 μl 培养细胞 >100个
血清 2.5 μl 组织 0.1mg
尿液 2.5 μl 毛发囊 1-3个
血浆 1 μl gDNA

1-400ng

植物叶片 2mm cDNA 1-400ng
植物粗提物 2-4 μl 质粒 0.1-10ng

储存

长期储存置于-20°C以下,可保存2年,避免反复冻融;短期使用置于4°C(3个月)保存,一经融化后请放置于4°C,勿再冻存。

反应实例

1. 模板适应性强,长片段和短片段都可有效扩增
Lane 1:λDNA 500bp, 2:λDNA 1kb, 3:λDNA 2kb, 4:λDNA 5kb, 5:λDNA 8kb, 6:λDNA 15kb, 7:λDNA 20kb, 8:human 500bp ,9:human 1kb, 10:human 2kb ,11:human 5kb, 12:human 8kb, 13:cDNA 166bp, 14:cDNA 552bp, 15:cDNA 960bp, 16:cDNA 1574bp, 17:cDNA 1705bp, 18:cDNA 2755b,p 19:cDNA 4128bp, 20:cDNA 7600bp, M:DNA Marker 10000
选取三种DNA模板,使用RAPA3G PCR Mix进行扩增,循环数统一为28 cycles,结果如上图所示,对于不同种类DNA模板和不同长度的靶基因,RAPA3G PCR Mix均有良好的扩增性能。
2. 对于粗制样品DNA具有极强的耐受性
分别以人全血、血清、叶片粗制品DNA以及大豆种子粗制品DNA为模板,使用RAPA3G PCR Mix进行PCR扩增,结果如上图展示,各种粗制样品都有良好的扩增,其中全血和血清可耐受15%。
3.扩增灵敏度高,λDNA模板低至0.1pg也可以有效扩增
以λDNA为模板,选取不同模板使用量,采用RAPA3G PCR Mix进行扩增2kb靶基因,循环数统一为28 cycles,结果如上图所示,λDNA模板低至0.1pg也可以有效扩增