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2×RAPA3G Multiplex PCR Mix(多重PCR Mix)

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
A0610A 2×RAPA3G Multiplex PCR Mix 1 ml 650
A0610B 10 ml 4800
Multiplex PCR又称多重PCR,是指在同一PCR反应体系里加上两对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,已被广泛应用于科学研究和疾病诊断等多个领域,特别适用于微量样本的多位点检测。
RAPA3G Multiplex PCR Mix多重PCR Mix)使用具有超强扩增性能的热启动RAPA3G DNA聚合酶和优化的多重PCR反应缓冲液,使其可有效扩增20重以上的PCR,具有极高的灵敏度,最大程度上减少了反应体系优化步骤。

特征

  • RAPA3G DNA聚合酶,超强扩增性能,极高抗杂质能力
  • 完全封闭的热启动特性,50℃以下100%无活性
  • 优化的反应缓冲体系,避免非特异性扩增
  • 高灵敏度,有效扩增0.1ng的人基因组DNA(20重)

储存

长期储存置于-20°C以下,可保存2年,避免反复冻融;短期使用置于4°C(3个月)保存,一经融化后请放置于4°C,勿再冻存。

反应实例

1. 应用2xRAPA3G Multiplex PCR Mix进行20重PCR扩增;用0.1ng、1ng、10ng和100ng的人基因组分别扩增30和35个循环,4%的琼脂糖凝胶,80V电泳300min,如图所示该Multiplex PCR Mix对不同量的模板具有很好的兼容性,且灵敏度可至0.1ng。
2.应用2xRAPA3G Multiplex PCR Mix分别用不同的模板进行20重PCR扩增,泳道1-5分别为:1μl抗凝全血分离的白细胞(相当于5μl抗凝全血)、1μl抗凝全血、1μl血清、1μl含50ng human gDNA的血清和50ng human gDNA, 结果显示RAPA3G Multiplex PCR Mix具有较强的抗杂质能力,对于全血等样品也能较好的扩增。
3.应用2xRAPA3G Multiplex PCR Mix和Supplier A和 Supplier B的同类产品进行15重PCR扩增,比较如下图,可见RAPA3G Multiplex PCR Mix扩增性能较其他同类产品具有卓越的扩增性能。

注意事项

1.当模板GC含量>70%时,请添加5×Q-Solution(Cat. No.: A3002)。
2.推荐引物设计原则:引物长度保持在22 - 30 bp,扩增产物长度在2kb以下,GC含量50% - 60%,尽量减少各引物之间TM的差值。
3.检测单引物特异性:多重PCR反应前,应对设计的引物逐一扩增,以确定是否有非特异性扩增和扩增效率。
4.引物推荐使用浓度:推荐扩增片段<300bp每条引物的反应终浓度为0.2-0.3μM,扩增片段>300bp每条引物的反应终浓度为0.05-0.15μM,如某些目标片段产量偏低或偏高,可适度调整其对应引物使用量以优化反应结果。
5.反应前需将引物制成10×Primer Mix:预先混合所有扩增引物,使每条引物浓度为0.5 ~3 μM。

常见问题及解决方案

1. 扩增产物少或没有扩增。
(1) 降低退火温度(每个梯度降低1℃)。
(2) 增加模板量
(3) 增加PCR循环数。
(4) 增加退火时间为90 sec,必要时可延长退火时间至3 min。
(5) 增加引物使用量。
2. 存在非特异性扩增。
(1) 减少循环数,提高退火温度(每个梯度降低1℃)。
(2) 减少引物使用量。
(3) 重新设计引物。
3. 电泳时条带模糊。
(1) 减少循环数(每次减少3个循环)。
(2) 减少起始模板量。
(3) 延长彻底延伸步骤时间至15 - 30 min。
(4) 减少退火时间。