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pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
D2401 pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体(含感受态) 20T 750
D2402 pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体 20T 500
pUC57 Simple通用克隆载体采用了TOPO酶连接技术,载体预先偶联上TOPO酶,当加入PCR扩增产物后,5 min就可以完成连接反应,连接阳性率高。pUC57 Simple通用克隆载体消除了大部分的常用酶切位点,便于后续亚克隆。该产品适用于Taq酶扩增的含“A”尾巴和高保真酶扩增的PCR产物的连接,载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。

优势

  • 快速连接,最快仅需5min;
  • 操作简单,仅需加入载体和片段即可;
  • 无需蓝白斑筛选,阳性率高;
  • 不包含任何酶切位点,便于后续亚克隆。
  • 平末端和A尾产物通用。
  • 注意:引物不能磷酸化。

组分

组分名称 D2401(20T) D2402 (20T)
pUC57 Simple Vector(5 ng/μl) 20μl 20μl
M13F(-47) (10 μM) 100μl 100μl
M13R(-47) (10 μM) 100μl 100μl
RTS DH5α冻干感受态 2瓶
Nano E.coli Transfection Reagent 1 ml

储存

RTS DH5α冻干感受态在未溶解状态下,可于-20℃长期保存(>2年),已经溶解后,请-60℃以下保存(3个月)。

图谱

TA克隆载体图谱

测序引物

正向测序引物:M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’;
反向测序引物:M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’;

实例

1.应用pUC57 Simple TA平端通用克隆载体分别连接长度为2008bp的平端产物和A尾产物,挑20个菌进行菌检,阳性率分别为95%和85%。
TA克隆载体
2.不同的载体与片段的摩尔比对连接效率的影响
片段长2432bp,使用载体与片段摩尔比分别为1:1;1:2;1:3;1:4;1:5;1:6;1:7;1:8;1:9;1:10 室温连接5min后转入RTS-DH5α冻干感受态,通用引物菌检阳性片段长度为菌检阳性片段大小为2572bp。结果表明载体与片段摩尔比1:1;1:2;1:3;1:4;1:6;1:9时均有较高的阳性率,而1:5;1:7;1:8;1:10则阳性率稍低,说明连接反应时应选择正确的载体与连接片段摩尔比,推荐最佳摩尔比为1:3。
3.不同连接时间对连接效率的影响
平端产物片段长2432bp,载体与片段摩尔比分别为1:3,分别室温连接5min、10min、15min、20min、25min、30min后转入RTS-DH5α冻干感受态,通用引物菌检阳性片段长度为菌检阳性片段大小为2572bp。结果表明不同的连接时间对于菌斑数和阳性率的影响较小,无明显差别,建议当连接片段<2500bp时,可选择室温连接5min。
4.不同长度的平端产物片段对连接效率的影响
平端产物片段长度分别为500bp、1kb、2kb和5kb,载体与片段摩尔比分别为1:3,前三个片段室温连接5min,5kb片段室温连接30min,转入RTS-DH5α冻干感受态,通用引物菌检。结果表明长片段连接后菌斑数较短片段减少,但阳性率无明显差别。
5.不同长度的A尾产物片段对连接效率的影响
A尾产物片段长度分别为500bp、1kb、2kb、2.5kb和5kb,载体与片段摩尔比分别为1:3,前四个片段室温连接5min,5kb片段室温连接30min,转入RTS-DH5α冻干感受态,通用引物菌检。结果表明片段长度在500bp~2.5kb之间时阳性率无明显差别,当片段长度≥5kb时阳性率有所降低,此时应适当增加菌检数量。