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RTS BL21(DE3)Chaprone 感受态细胞

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
K0003 RTS BL21(DE3) Chaprone助溶表达感受态细胞 10T 800
BL21(DE3)Chaprone感受态细胞中含有分子伴侣蛋白质粒,其表达产物可协助重组蛋白正确折叠形成可溶活性蛋白。分子伴侣蛋白质粒为氯霉素抗性(chloramphenicol,Cmr)的表达受控于四环素(tetR)操纵子,因此该感受态不适用于氯霉素抗性表达质粒的转化。
BL21(DE3)Chaprone感受态细胞使用HaiGene独有的化学感受态专利技术制备,其室温可保存1个月、-20°C可保存2年(推荐保存温度)、-80°C可长期保存性能无下降。运输过程中无需干冰,可室温运输、可常规冰袋运输(推荐运输温度)。该感受态细胞为热激感受态细胞,转用于蛋白表达(不可用于克隆和载体构建),经42°C热激1min可获得105~106cfu/μg效价,可满足质粒转化要求。该制品使用简单、运输、储存方便。

组分

组分名称 数量
RTS BL21(DE3)Chaprone Competent Cell(10T) 1瓶
Nano E.coli Transfection Reagent 1 ml

储存

RTS系列感受态为干粉形式,均可室温保存3天,长期保存-20°C(2年)。经Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受态必须分装后,并于-60°C以下保存。溶解后的感受态细胞避免反复冻融,在-60°C以下可保存6个月。

使用方法

1. 从-20°C冰箱中取出Nano E.coli Transfection Reagent彻底融化,放置于冰上。取300 μl Nano E.coli Transfection Reagent加入到一支冻干感受态细胞中,并分装到10支1.5 ml EP管中(每支30 μl),于-60°C以下保存(或立即使用)。
2. 将10~100 ng质粒DNA(不可使用连接产物、不可使用氯霉素筛选标记质粒)加入到分装的感受态细胞中,轻弹EP管(或枪头轻轻吹打),置于冰上15min。
3. 置于42°C热激1 min后,迅速置于冰上急冷2 min。
4. 热激完毕后,向上述感受态细胞中加入450 μL不含抗生素的SOC(或LB)培养基,37°C振荡(225 rpm)培养60 min。使质粒上抗性标记基因表达,菌体复苏。
5. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。(含相应质粒抗生素和20 μg/ml氯霉素)
6. 将平板置于37 °C培养,12~18小时后可出现菌落。
7. 挑选生长良好的菌落,接入LB培养基(含相应质粒抗生素,20 μg/ml氯霉素),37℃剧烈振荡培养过夜。
8. 1/50比例接入新的LB培养基(含相应质粒抗生素,20 μg/ml氯霉素,0.5 mg/ml L-阿拉伯糖)37 ℃剧烈振荡培养至菌体密度OD600约0.3(约2h)。
9. 加入终浓度2 ng/ml四环素(诱导chaprone伴侣蛋白表达),37℃剧烈振荡培养至OD600约0.5(约2~4h)。
10. 加入适量IPTG(0.1-1 mM), 15℃振荡培养24h(培养摇床无法制冷条件下,室温诱导8~12h)。
11. 4,000 rpm室温离心15 min,收集细胞,进行蛋白表达和可溶性表达分析。