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PBCV DNA连接酶

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
D3102 PBCV DNA连接酶 1250U 600
D3102 5KU 2,000
PBCV DNA 连接酶也称为SplintR 连接酶或 Chorella 病毒 DNA 连接酶,它能够高效催化相邻的 DNA 核苷酸的连接,这个连接过程需要一条互补的 RNA 在两条 DNA 单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。PBCV DNA连接酶的这种活性远远优于传统的T4 DNA连接酶,有助于miRNAs和mRNAs,包括SNPs在内的研究方法的创新。另外,在二代测序和分子诊断等众多领域中,PBCV DNA连接酶是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性,对 RNA 介导固定的 DNA 底物亲和性强(米氏常数 Km = 1 nM),能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定 RNA。因此,在 RNA 检测技术中,PBCV DNA 连接酶不失为最佳选择用酶。

组分

组分名称 数量
PBCV DNA Ligase(25 U/μl) 50μl
10×PBCV Ligation Buffer 250μl

应用

  • 单链DNA的连接
  • 基于探针法的miRNA的检测
  • SNP或剪接体的检测
  • RASL分析
  • 活性定义

    1 单位指 20 μl 反应体系中,1×PBCV 连接酶反应缓冲液,16℃ 条件下,15 分钟内能使 2 pmol 的DNA:RNA 杂交底物连接反应完成50%所需的酶量。

    反应温度及失活

    该酶的最佳反应温度为25度,可在16-37度之间优化,37度可明显提高反应的特异性;该酶在65°C 加热20min即可失活。

    储存

    -20℃可保存3年。

    使用注意事项

    1. 1×PBCV Ligation Buffer:50mM Tris-HCl pH 7.5,5mM MgCl2,10mM DTT。
    2. 该酶对ATP的要求比较宽泛,10-100uM ATP范围内都可发挥活性,5mM Mg2+可显著增加连接产物的量,最佳ph为7.5-8.0。
    3. 该酶对一价阳离子非常敏感,如Nacl或KCl的浓度应低于50mM,100mM的Nacl会完全抑制连接反应。
    4. 该酶的反应温度为16~37℃,随着温度的上升酶活性会提高,但此时腺苷化产物也随之增加,最佳温度为25 ℃。
    5. 连接效率随着夹板RNA长度的减少而降低,当长度小于等于10nt时,连接效率为零。
    6. 供体的5’端第一个碱基为“A/T”时连接效率最高。
    7. 受体的3’端第一个碱基为“T”时连接效率最高,3’端第一个碱基为“G”时连接效率最差。