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尿嘧啶DNA糖基酶(Uracil N-Glycosylase, UNG)

产品编号 产品名称 规格 价格(元) 说明书
C5015A UNG (Uracil N-Glycosylase) 1,000U 600
C5015B 5,000U 2,000
A0303 dNTP/dUTP Mixture 1 ml 400
尿嘧啶DNA糖基酶(Uracil N-Glycosylase,UNG)又名Uracil-DNA Glycosylase, UDG, 为来源于E. coli uracil N-glycosylase基因的重组表达蛋白,分子量为26kDa。它可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶,但对RNA无活性。 UNG主要应用于PCR扩增产物的防污染,作用原理基为:如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中,形成了含dU碱基的PCR扩增产物,该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U基的糖苷键,降解该PCR扩增产物。

组分

组分名称 数量
Uracil N-Glycosylase (5 U/μl) 200 μl/1 ml

应用

  • 去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基
  • 去除 PCR 残存污染
  • 活性定义

    在标准PCR反应体系下,37℃条件下,1小时降解1µg含dU碱基的单链DNA的酶量为一个活性单位。

    活性测试

    UNG酶活性测试
    取1μg dUTP PCR产物,用UNG 37℃消化30min后进行琼脂糖凝胶电泳。 Lane 1:对照(不加UNG酶);Lane 2-7:分别为 2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37度消化30min后的PCR产物;M:D2000 DNA Marker。

    性能测试

    UNG酶性能测试
    UNG在标准PCR体系下(50ul体系)性能测试。 处理方法为:在反应体系中分别加入不同量的UNG(如图所示),50度2min,95度5min,然后进入PCR循环扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。Lane 1-3:标准dNTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U; Lane 4-6:dNTP/dUTP Mixture,UNG用量0.25U/0.5U/1U;M:D10000 DNA Marker。

    反应buffer

    Uracil DNA Glycosylase (UNG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。

    酶保存液

    20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。

    储存

    -20℃可保存2年,避免反复冻融。

    热失活

    95℃,5min。
    UNG酶热失活
    取1μg dUTP PCR产物进行UNG热失活测试。 Lane 1:对照(不加UNG酶);Lane 2: 1U UNG酶37度消化30min;Lane 3: 1U UNG酶95度加热5min后,再加入PCR产物消化(37度消化30min); Lane 4: 1U UNG酶95度加热10min后,再加入PCR产物消化(37度消化30min);M: D2000 DNA Marker。